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Molecular farming을 위한 새로운 형질전환 vector의 개발

Molecular farming을 위한 새로운 형질전환 vector의 개발

Material type
단행본
Personal Author
문제선, 주관연구책임 전재홍, 연구 고세리, 연구
Corporate Author
한국생명공학연구원, 주관연구기관
Title Statement
Molecular farming을 위한 새로운 형질전환 vector의 개발 = Analysis of transcription-factor type tumor suppressor network in cancer development / 주관연구책임자: 문제선 ; 연구원: 전재홍 , 고세리 ; 주관연구기관명: 한국생명공학연구원.
Publication, Distribution, etc
[서울] :   교육과학기술부,   2010.  
Physical Medium
71 p. : 삽도, 챠트 ; 30 cm.
General Note
단계구분: 3단계  
중사업명: 21C 프론티어연구개발사업  
세부사업명: 자생식물이용기술개발사업(Plant Diversity Research Center)  
대과제명: 노인성 치매질환의 예방 및 치료를 위한 백신용 형질전환 식물개발  
Bibliography, Etc. Note
참고문헌: p. 71
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Holdings Information

No. Location Call Number Accession No. Availability Due Date Make a Reservation Service
No. 1 Location Science & Engineering Library/Sci-Info(Stacks1)/ Call Number 618.97683 2010 Accession No. 121195528 Availability Available Due Date Make a Reservation Service B M

Contents information

Table of Contents

표제지

제출문

보고서 초록

요약문

SUMMARY

CONTENTS

목차

제1장 연구개발과제의 개요 16

제2장 국내외 기술개발 현황 17

1절. 개발하고자 하는 기술의 정의 17

2절. 본 과제 관련 국내외 연구 동향 17

3절. 개발하고자 하는 기술의 특허 분석 17

제3장 연구개발수행 내용 및 결과 19

1절. Toxoflavin의 합성법 개발 19

1. 기존에 보고된 합성 방식에 의한 toxoflavin의 합성 19

가. 6-Hydroxy-3-methyl-2-methyltio-4(3H)-pyrimidinone (2)의 제조 19

나. 6-Chloro-3-methyl-2-methyltio-4(3H)-pyrimidinone (3)의 제조 19

다. 6-Chloro-2-hydroxy-3-methyl-4(3H)-pyrimidinone (4)의 제조 19

라. 6-Chloro-2-hydroxy-3-methyl-5-nitro-4(3H)-pyrimidinone (5)의 제조 19

마. 6-Chloro-5-formamido-2-hydroxy-3-methyl-4(3H)-pyrimidinone (6)의 제조 20

바. 1,6-Dimethylpyrido[5,4-e]-1,2,4-triazine-5,7(1H,6H)-dione (7,8)의 제조 20

2. Toxoflavin의 합성 (Small-Scale Synthesis) 21

가. 6-Chloro-3-methyluracil로부터 6-(1-Methylhydrazino)-3-methyl-uracil(2)의 합성. 21

나. 6-(1-Methylhydrazino)-3-methyluracil으로부터, 1,6-dimethylpyrimido[5,4-e]-1,2,4-triazi-ne-5,7(1H,6H)-dione(4)의 합성. 21

다. 6-Chloro-3-methyluracil로부터 6-(1-Methylhydrazino)-3-methyluracil을 합성. 22

라. 6-(1-Methylhydra-zino) -3-methyluracil로부터 toxoflavin과 toxoflavin 4-oxide을 합성. 22

3. Toxoflavin의 합성 (Large-Scale Synthesis) 23

가. 6-Chloro-3-methyluracil으로부터 6-Chloro-3-methyl-5- nitrouracil(2)의 합성 23

나. 6-Chloro-3-methyl-5-nitrouracil으로부터 6-Chloro-5-formamido-3-methyl-5-nitrouracil (3)의 합성 23

다. 6-Chloro-5-formamido-3-methyl-5-nitrouracil으로부터 1,6-Dimethylpyrido[5,4-e]-1,2,4-triazine-5,7(1H,6H)-dione (5)의 제조 23

라. 6-Chloro-3-methyluracil으로부터 6-chloro-3-methyl-5-nitrouracil의 합성. 23

마. 6-Chloro-3-methyl-5-nitrouracil으로부터 6-chloro-5-formamido-3-methyl-5-nitrouracil로의 합성. 24

바. 6-Chloro-5-formamido-3-methyl-5-nitrouracil으로부터 1,6-Dimethylpyrido[5,4-e]-1,2,4-triazine-5,7(1H,6H)-dione의 합성. 24

2절. 모델 쌍자엽 및 단자엽 식물에서의 범용 가능성 검증 25

1. Toxoflavin에 대한 다양한 식물의 반응 25

2. TflA(selection marker gene)와 toxoflavin (selection compound)에 의한 arabidopsis의 형질전환 25

3. 선발마커 tflA를 활용한 유용 유전자의 도입 가능성 타진 26

가. pEZR(H)-LN binary vector (EZR, GFP only vector control)와 HpaG를 포함한 pEZR(H)-LN vector (H-EZR) 27

나. Homozygote으로 선발된 T₃ EZR5, EZR11 vector 라인과, T₃ H-EZR5, H-EZR7 HpaG-EGFP 라인 28

다. HpaG-EGFP 과발현 애기장대 (H-EZR)의 transcriptome profile을 microarray 실험 29

라. T₃ EZR vector (C3) 라인과 T₃ HpaG-EGFP (T3) 라인의 pooled total RNA 29

마. Arabidopsis gene list에서 각각 5개(MA-U1 to MA-U5), 4개 (MA-D1 to MA-D4)의 유전자의 semi-quantitative RT-PCR 31

바. HpaG에 의해 co-regulation 되는 유전자 탐색 및 sub-group으로 분리 31

사. HpaG-EGFP를 발현하는 T₃ H-EZR 애기장대의 유식물에서 HpaG-EGFP 단백질의 subcellular localization을 Laser scanning confocal microscopy (LSCM)로 관찰 34

4. 담배 형질전환 최적 조건 확립 34

가. 담배의 형질전환을 위한 신규 선발 marker gene을 가지는 vector의 제작 34

나. 담배에 대한 toxoflavin의 최적 선발농도 결정 35

다. 담배에서 Toxoflavin 분해 유전자를 이용한 형질전환 방법 확립 및 기존의 vector와 비교 검증 35

5. 감자 형질전환 최적 조건 확립 38

가. 재분화시에 toxoflavin 농도 및 광의 세기/처리시간에 의한 최적의 형질전환 조건의 확립을 시도 38

나. Toxoflavin 분해 유전자를 이용한 형질전환 방법 확립 39

다. 기존의 vector와 비교 검증 40

라. tflA유전자를 사용한 형질전환 감자 생산 40

마. tflA유전자를 사용한 형질전환 감자 생산, 확인 42

바. tflA유전자를 사용한 효율적 형질전환 시스템 연구 43

사. 신규 선발유전자를 사용한 유용유전자(HapG) 도입 45

아. Toxoflavin 농도별 감자의 재분화 조건 확립 46

자. TflA를 vector를 이용한 형질전환 감자 분석 및 생산 47

차. TflA vector를 이용한 HpaG의 형질전환 감자 분석, 실용화 검증 51

3절. 형질전환이 매우 낮은 작물의 형질전환체 제작 55

1. 고추의 Toxoflavin 농도별 선발 조건 확립 55

가. Toxoflavin 분해 유전자를 이용한 고추의 형질전환 방법 확립 55

나. 고추로의 Toxoflavin 분해 유전자의 도입 확인 56

다. RsaI 유전자를 이용한 고추의 형질전환 방법 확립 57

라. 고추로의 RsaI 유전자의 도입 확인 57

2. 수박공대의 Toxoflavin 농도별 선발 조건 확립 58

가. Toxoflavin 분해 유전자를 이용한 수박공대의 형질전환 방법 확립 59

나. 수박공대로의 Toxoflavin 분해 유전자의 도입 확인 59

3. 조롱박의 Toxoflavin 농도별 선발 조건 확립 60

가. Toxoflavin 분해 유전자를 이용한 조롱박의 형질전환 방법 확립 61

나. 조롱박로의 Toxoflavin 분해 유전자의 도입 확인 61

다. 수박공대의 tflA 형질전환체 확보 62

라. 수박공대 형질전환체 분석 62

마. 조롱박의 tflA 형질전환체 확보 63

바. 조롱박에 tflA 유전자를 형질전환하여 과실을 확보 및 T₁종자 확보. 63

4. RNAi vector construction with toxoflavin selection 63

가. 고추의 tflA 형질전환체 확보 64

5. 형질전환 벡터 구축 65

가. 벡터 CGMMV-CP::tflA/ANDA(RNAi)의 구축 65

나. 수박공대 형질전환체 66

다. 조롱박 형질전환체 66

라. Toxoflavin을 이용한 tflA::rsa1 유전자의 고추 형질전환체 확보 67

제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 69

제5장 연구개발결과의 활용계획 70

제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 71

제7장 참고문헌 72

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