제1장 서론(INTRODUCTION) = 15
제2장 국내외 기술개발 현황(STATE OF THE ART TECHNOLOGIES) = 20
제3장 연구개발수행 내용 및 결과(EXPERIMENTALS AND RESULTS) = 21
제1절 재료 및 방법(Materials and Methods) = 21
1. 실험 재료(Materials) = 21
2. 실험 방법(Methods) = 21
1) Rat에서 T 및 B 세포 분리(Isolation of T and B cells from rat) = 21
2) Rat에게 스트레스의 유도(Stress induction to rat) = 21
3) In situ PCR = 22
4) Rat으로 부터의 각종 조직에서의 total RNA의 분리 정제(Total RNA purification from various rat tissues) = 22
5) 재조합 urocortin 및 발현 및 정제(Expression and purification of rat CRF and urocortin) = 23
6) 항 urocortin 및 CRF 항체 제조(Preparation of anti-urocortin or anti-CRF antibodies) = 23
7) 항-urocortin 단일클론 항체의 제조(Production of anti-urocortin monoclonal antibody) = 24
8) Computer simulation을 이용한 urocortin의 3차 모델 구조 분석(Analysis of the 3 dimensional structure of urocortin using computer simulation) = 25
9) In vivo 바이오틸화 된 urocortin 단백질의 발현, 정제 및 CRFR 발현세포 동정(Expression and purification of In vivo biotinylated urocortin and analysis of the CRFR expressing cells) = 25
10) 스트레스에 의한 혈중 urocortin의 변화 분석(Analysis of urocortin in rat serum altered by stress) = 25
11) 용해성(soluble) CRF-수용체인 CRF-binding protein의 재조합 단백질로서의 발현(Expression of recombinant CRF-binding protein) = 26
12) 대장균내에서 rat leptin의 재조합 단백질로서의 발현 및 정제(Expression and purification of recombinant rat leptin in E. coli) = 26
13) Leptin의 In vitro 및 In vivo 생리활성 측정(Analysis of In vitro and In vivo biological activity of leptin) = 26
14) Luciferase reporter 유전자를 이용한 leptin 활성 측정 시스템 개발(Development of a system for measuring biological activity of leptin using luciferase reporter gene) = 27
15) Rat의 Urocortin Ⅱ의 클로닝 및 RT-PCR에 의한 각종 rat 조직에서 UCN2의 발현조사(Cloning of rat urocortin Ⅱ and analysis of rat urocortin Ⅱ expression in various rat tissues) = 28
16) 재조합 urocortin Ⅱ의 발현(Expression of recombinant rat urocortin Ⅱ) = 28
제2절 연구 결과 및 고찰(Results and Discussion) = 29
1. 알코올에 의해 유도되는 스트레스가 생체의 통합적인 행동, 감성 변화에 미치는 영향을 분석(Analysis of alcohol stress affecting to the biological system) = 29
2. 스트레스에 의해 유도되는 CRF와 urocortin의 발현을 각 조직에서 mRNA수준에서 분석(Analysis of expressions of CRF and urocortin induced by stress on mRNA level) = 32
3. Rat CRF 및 urocortin의 cloning 및 재조합 단백질의 발현(Cloning and expression of rat CRF and urocortin의 cloning) = 32
4. CRF 및 urocortin에 대한 폴리클론날 항체를 제조 및 특성 규명(Generation of polyclonal antisera against CRF and urocortin and their characterization) = 34
5. 항-urocortin 단일클론 항체의 제조 및 특성 규명(Production and characterization of anti-urocortin monoconal antibody) = 37
6. Computer-Simulation을 이용한 urocortin의 3차 구조 규명(Analysis of three dimensional structure of urocortin using computer simulation technology) = 37
7. 바이오틸화된 urocortin을 이용한 CRF 수용체 발현분석 시스템의 확립(Development of the analyzng system of CRFR expression using biotinylated urocortin) = 40
8. 스트레스에 의한 urocortin 발현양상 변화연구(Change of plasma urocortin level by stress) = 45
9. 신경펩타이드와 이들의 수용체 및 결합단백질의 상호작용에 대한 연구(Interaction between the neuropeptides and their receptors) = 45
10. Rat leptin 단백질의 발현 및 성질 규명(Expression and charaterization of rat leptin) = 51
11. 다양한 조직에서 leptin 수용체 발현 분석(Analysis of rat leptin receptors from various rat tissues) = 53
12. 비장으로부터 leptin long form receptor의 분리 및 염기서열 분석(Isolation of long form leptin receptor and analysis its nucleotide sequence) = 59
13. STAT sensitive luciferase gene system을 이용한 leptin 활성 측정시스템 개발(Biological assay of leptin using STAT sensitive luciferase gene system) = 61
14. Rat urocortin Ⅱ 유전자의 동정 및 발현(Isolation and characterization of rat urocortin Ⅱ) = 66
제4장 연구구개발목표 달성도 및 대외기여도 (SIGNIFICANT OF RESULTS) = 71
제1절 연구개발목표 달성도 = 71
제2절 연구개발 결과의 대외 기여도 = 71
제5장 연구개발결과의 활용계획(APPLIFICATION OF RESULTS) = 73
제6장 참고문헌(REFERENCES) = 74
