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Characterization of Plant Factors Interacting with Transcription Factor, Tsi1 or Cucumber Mosaic Virus 1a

Characterization of Plant Factors Interacting with Transcription Factor, Tsi1 or Cucumber Mosaic Virus 1a

자료유형
학위논문
개인저자
함병국
서명 / 저자사항
Characterization of Plant Factors Interacting with Transcription Factor, Tsi1 or Cucumber Mosaic Virus 1a / Byung-Kook Ham.
발행사항
서울 :   고려대학교 대학원 ,   2003.  
형태사항
ⅹⅳ, 181 p. : 삽도 ; 26 cm.
학위논문주기
학위논문(박사) -- 고려대학교 대학원 생명공학과 분자생물학전공 2002
학과코드
0510   6YD48   64  
서지주기
참고문헌 : p. 167-170
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전자정보

No. 원문명 서비스
1
Characterization of Plant Factors Interacting with Transcription Factor, Tsi1 or Cucumber Mosaic Virus 1a
PDF 초록 목차
No. 소장처 청구기호 등록번호 도서상태 반납예정일 예약 서비스
No. 1 소장처 과학도서관/학위논문서고/ 청구기호 0510 6YD48 64 등록번호 123022930 도서상태 대출가능 반납예정일 예약 서비스 B M
No. 2 소장처 세종학술정보원/학위논문실/ 청구기호 0510 6YD48 64 등록번호 153038438 도서상태 대출가능 반납예정일 예약 서비스
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No. 1 소장처 과학도서관/학위논문서고/ 청구기호 0510 6YD48 64 등록번호 123022930 도서상태 대출가능 반납예정일 예약 서비스 B M
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No. 1 소장처 세종학술정보원/학위논문실/ 청구기호 0510 6YD48 64 등록번호 153038438 도서상태 대출가능 반납예정일 예약 서비스

컨텐츠정보

초록

Protein-protein interactions play important roles in signaling processes. In this study, plant factors interacting with Tsi1, the EREBP/AP2-type transcription factor, or cucumber mosaic virus la were isolated and characterized.
A clone named Tsip1, Tsi1-interacting protein 1, was isolated whose translation product apparently interacted with Tsi1. The transcripts homologous to the Tsip1 gene are expressed in leaves, flowers, and stems but nearly undetectable in roots. RNA gel blot analysis showed that the expression of Tsip1 was increased by treatment with NaC1, ethylene, salicylic acid, or gibberellic acid. The Tsip1 protein was targeted to the surface of chloroplasts, and the targeted Tsip1 proteins were diffused to the cytoplasm of protoplasts in the presence of salicylic acid (SA). In addition, Tsip1 was found to interact with Tsi1 in the nucleus. The overexpression of the Tsip1 gene induced expression of several pathogenesis-related genes under normal conditions, and improved the tolerance to salt. These results suggest that Tsip1-Tsi1 interaction serves to regulate gene expression and Tsip1 might play a role in facilitating transcriptional activation via cofactor interaction.
The cucumber mosaic virus (CMV)-encoded la protein has been implicated to play a role in viral replication. The full-length of CMV RNA 1 cDNA clone was generated when synthesized by T7 RNA polymerase. The amino acid sequence analysis of the la protein showed that the homology was found in decreasing order with CMV-O, CMV-Fny, CMV-Y, CMV-Q, PSV, TAV, BMV, CCMV and BBMV. A tobacco cDNA library expressing the GAL4 activation domain fusion protein was screened using 1a as a bait, and 13 yeast colonies were identified that expressed reporter genes in a 1a dependent manner. Of these genes, Tcoi1 (Tobacco CMV 1a interacting protein 1), TCOI2 (Tobacco CMV 1a interacting protein 2), TLP (Tobacco Thaumatin Like Protein), Tsip1 were selected for further study. RNA gel blot analysis showed that the expression of TCOI1, TLP, and Tsip1 was increased by CMV inoculation, but TCOI2 was expressed constitutively. AtCOIK and AtTsipL were Arabidopsis clones similar to TCOI2 and Tsip1, respectively. Transcripts corresponding to AtCOIK and AtTsip1L were up-regulated slightly in response to CMV infection, but were expressed constitutively into various stresses and hormones, such as NaCl, ABA, BA, IBA and GA. AtCOIK::DsRFP was distributed over the endoplasmic reticulum (ER), with strongest accumulation on the perinuclear region of the ER. This implicated that AtCOIK and CMV 1a colocalize on ER and AtCOIK is capable of interacting with CMV 1a단백질-단백질 상호 작용은 생물체의 신호 전달 과정에 있어서 매우 중요한 역할을 한다. 본 논문에서는 EREBP/AP2 전사 단백질인 Tsil 또는 오이 모자이크 바이러스 la 단백질과 상호 작용하는 식물 인자들을 선발하고 그 인자들의 기능을 밝히고자 하였다.
Tsil과 상호 작용하는 담배 인자인 Tsipl을 선발 하였다. Tsipl은 뿌리를 제외한 모든 식물 기관에서 발현 되었으며, 염, 에틸렌, 살리실 산, 지베렐릭 산에서도 유전자의 발현이 증가
되는 것을 관찰할 수 있었다. Tsipl은 엽록체의 외부 쪽에 위치하고, 살리실 산을 처리하면 원형질 쪽으로 이동한다는 것을 확인 하였다. Tsil과 동시에 공동 전이를 시켰을 시에는 두 단백질이 핵에서 존재하는 것을 관찰 하였다. Tsipl 유전자를 도입한 형질 전환 식물체에서는 다양한 병 발생 관련 유전자의 발현을 관찰 하였고, 더 나아가 염 내성도 보이는 것을 밝혀내었다. 이런 결과로 보아 Tsipl-Tsil 상호 작용은 유전자 발현을 조절하는 데 역할을 할 것이라 여겨지고, 더 나아가 Tsipl은 co factor로서 Tsil의 전사 작용을 촉진시키는 역할을 할 것이라 생각된다.
오이 모자이크 바이러스 (CMV)-Strain Kor 1a 단백질은 바이러스의 복제에 역할을 담당할 것이라 보고 되어 왔지만, 이 단백질이 식물체의 어떤 단백질과 관련되어 바이러스 복제 구성요소를 이루는 지는 밝혀져 있지 않았다. 우선적으로 CMV RNA1 cDNA가 분리 되었고, T7 promoter를 연결하여 T7 RNA polymerase를 이용한 CMV-Kor RNA1을 생산하였다. CMV-Kor 1a 단백질의 아미노산 서열을 분석해 본 결과 CMV-O, CMV-Fny, CMV-Y, CMV-Q, PSV, TAV, BMV, CCMV, BBMV 순서로 상동관계를 보였다 CMV la 단백질을 이용하여 이것과 상호 작용하는 담배 인자 13가지를 분리하였고, Tcoil (Tobacco CMV 1a interacting protein 1), Tcoi2 (Tobacco CMV 1a interacting protein 2), TLP (Tobacco Thaumatin Like Protein), Tsipl의 기능 분석을 수행하였다. Tcoil, TLP, Tsip1은 CMV 감염에 있어서 증가되는 발현 양상을 나타내었지만, Tcoi2는 발현 양상의 변화를 보이지 않았다 . AtCOIK과 AtTsipL은 Tcoi2와 Tsip1과 상동관계를 보이는 유전자로 아기 장대풀에서 분리 되었다. AtCOIK과 AtTsipL은 CMV 감염에 대해서 유전자의 발현이 증가하는 것을 관찰할 수 있었으나, 염, ABA, BA, IBA, 지베렐릭 산에 대해서는 발현 변화를 나타내지 않았다. AtCOIK의 경우 소포체에 존재한다는 것을 관찰 하였고, 특히 핵 주변의 소포체에 많은 양이 축적된다는 것으로 나타났다. 이런 결과들로 선발된 유전자들은 CMV la와 상호 작용하는 추정적 식물 인자들로 여겨진다

목차

TABLE OF CONTENTS = 4
LIST OF TABLES = 6
LIST OF FIGURES = 7
LIST OF ABBREVIATION = 14
ABSTRACT = 15
Chapter 1. Tsip1, a Novel Zn Finger Protein, Modulates the Transcription Regulation of Tsil as a Co-factor in Tobacco. = 20
 1. ABSTRACT = 21
 2. INTRODUCTION = 23
 3. MATERIALS AND METHODS = 26
 4. RESULTS = 39
 5. DISCUSSION = 51
 6. REFERENCES = 55
Chapter 2. Characterization of Putative Tobacco and Arabidopsis Host factor Interacting with Cucumber Mosaic Virus 1a = 94
 1. ABSTRACT = 95
 2. INTRODUCTION = 97
 3. MATERIALS AND METHODS = 101
 4. RESULTS = 111
 5. DISCUSSION = 117
 6. REFERENCES = 122
Appendix. Modification of Cucumber Mosaic Virus (Strain Kor) RNA1, 2 and 3 for development of a gene delivery system = 170
 1. ABSTRACT = 171
 2. INTRODUCTION = 173
 3. MATERIALS AND METHODS = 175
 4. RESULTS = 180
 5. DISCUSSION = 184
 6. REFERENCES = 186